Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病变进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现去甲自身抗原到经常出现1型式高血压流行病学患者的成果率在学童时期就有更好的详细描述，多个去甲自身抗原感染性的学童里有70%在血清反转后10年内罹患高血压，而随访15年的学童这一%上升到84%。来得之下，占流行病学1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的发病功能还没获取更好的分析。

愈加多的人开始运用于分期系统来定义1型式高血压的成果：个体在经常出现多种去甲自身抗原时进到第1期中，经常出现血糖异常时进到第2期中，经常出现患者时进到第3期中。一些多发去甲自身抗原感染性的个体，在1期和2期，成果较慢，并发展为发病的1型式高血压。我们之前详细描述了一分组在首次检测到多种去甲自身抗原抽样后最少10年无高血压的较慢成果者，这分组患者人数少，但外观上非常确切。随后，我们辨认出去甲自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞核催化在成果加速的患者里基本不存在，但在近来发病和近十年存在的高血压患者里很易于检测到。这确实指出，与成果患者来得，这些患者自身抗原的调节增强。

以前分析指出，尽管调节性T细胞核(Treg)为数经常性，但高血压患者存在一些基本功能缺陷，其里有数对IL-2的催化能力降低。此外，高血压患者里的现象CD4+T细胞核确实对调节更为具抵抗性，观感为现象T细胞核的依赖性逼近，自然现象造成的Treg和体外造成的诱导Treg，以及淋巴细胞年中的CD4+T细胞核里IL-2催化逼近。本分析的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群总括加速成果者里的外观上，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以老年人为基础的中轴分析，在21岁请注意患病的患者亲属里检查1型式高血压的致命因素。我们之前详细描述了近十年加速成果者的外观上，他们始终保持多重去甲自身抗原感染性至少10年，但没经常出现高血压的流行病学患者，慢性或非顺利进行性免疫性。随后，10名继续始终保持无高血压并不想共享大量尿液抽样的加速成果者划定T和B细胞核基本功能分析方法。在目前的分析里，8名慢成果者(SP分组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗原感染性。所有的行动者都处于1型式高血压成果的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗原对某些淋巴细胞的感染性催化，然而，一名患者已经处于2期最少6年，但没经常出现流行病学患者，一名患者被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集试验抽样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法里对该NADPH顺利进行了单独审计。受控外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核拳法和T细胞核依赖性试验审计NADPH里Treg的频带、基因型式和基本功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、举例来说和回归)顺利进行无都由聚类分析方法，审计Treg基因型式。

结果：与生活品质NADPH来得，来自慢成果体的思绪CD4+T细胞核的都由聚类结果显示，作用于的思绪CD4+ Treg频带上升，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c上升的患者与成果加速者和比如说的对照分组来得，Treg谱大同小异。基本功能分析方法指出，与生活品质NADPH来得，来自加速成果体的Treg依赖性的CD4+现象T细胞核依赖性显著受损。观感为对现象CD4+T细胞核CD25和CD134暗示的依赖性上升。

平面图1 有系统的基因型式分析方法结果显示，CD4+Treg甲型式在慢成果函数调用里上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的能活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物暗示确认出10个元簇:思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个战略性(100个战略性)，更为大的元战略性(10个元战略性)在结点分组外围打磨。每个结点里的饼平面图坚称单个标识的暗示级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整体标识暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成平面图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于金属量为每个metacluster装等分(金属量> 0.05%)确定为HD和SP分组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞核(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞核(l)。橙色左上角值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模型式证实，Treg频带的上升是成果加速的标志。基准旁路(a - f)和大豆分析方法(g-k)比较SP行动者和比如说的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的指标性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利进行受控，各种类型FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(星点)分组以及NADPHSP 606(橙色)里CD25+ cd127的频带汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的装等分;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)油菜簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示气压着色，左下角厚实的簇被标识为SP和HD函数调用之间的不同。(j)装等分结果显示了在SP(星点)和HD(灰点)分组里，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对于金属量(%)。(k)直方平面图结果显示每个簇的基因型式(粉红色)和Treg标识相对于暗示与背景暗示(金色);上列，缓存Treg_3;下面动身，缓存Treg_4。背景与所有其他簇里标识的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与生活品质献血者来得，成果加速者思绪treg的GITR上升。每个思绪CD4+T细胞核元簇(思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示标识的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的暗示热平面图(sp606不有数在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR暗示串联，结果显示直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有NADPH有数，p< 0.05(金色)NADPHSP 606和比如说的HD不有数在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从基准旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)串联，结果显示直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自加速成果的CD4+ treg细胞核控制现象CD4+T细胞核的能力降低。SP分组用金色的中央线和左上角坚称，HD分组用紫色的中央线和左上角坚称，橙色的中央线/左上角坚称NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按掩蔽的%滴定。用抗CD3 /28微珠凋亡细胞核，指导3几天后顺利进行流式细胞核拳法检测。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。运用于感染性对照(作用于的作出催化细胞核不含treg)量化依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T细胞核对加速成果的T细胞核凋亡的依赖性更为敏感。SP分组用金色的中央线和左上角坚称，HD分组用紫色的中央线和左上角坚称，橙色的中央线/左上角坚称NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按掩蔽的%滴定。用抗CD3 /28微珠凋亡细胞核，指导3几天后顺利进行流式细胞核拳法(CD25反染)和细胞核因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同指导。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE依赖性百分比(b)。(c,d) CD25依赖性百分比(c)和CD134依赖性百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自加速成果子的凋亡思绪CD4+Treg在GITR暗示里获取了引入和丰富，强调了全面性分析Treg在1型式高血压风险个体里的异质性的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28